一、原理

糧食飼料版T2毒素ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法定量檢測樣品中T2毒素的殘留量。

二、適用范圍

定量檢測糧食、飼料等樣品中T2毒素的殘留。

三、糧食飼料版T2毒素ELISA檢測試劑盒特點及技術(shù)指標

* 檢 測 時 間 ： 30 min

* 試劑盒靈敏度： 1ppb(µg/kg)

* 樣本處理方法簡單，并與赭曲霉前處理方法部分統(tǒng)一化，節(jié)省了人力物力；

* 試劑盒提供工作濃度標準品，使用更方便；

* 試劑盒檢測樣本的靈敏度和準確度：

試劑盒特異性：

四、所需材料

儀器：微孔板酶標儀450 nm/630 nm、振蕩器、離心機、刻度移液管（10 mL）、洗耳球、天平（感量0.01 g）、離心管（5 mL, 50 mL）、漏斗、分液漏斗、燒杯、定量分析濾紙

微量移液器：單道 1µL～10 µL、10 µL～100µL

多道 50µL～300µL

試劑：甲醇、去離子水。

五、 試劑盒組成

*注：A、B、C、D、E共5個標準品濃度為：0ppb, 1ppb, 3ppb, 9ppb, 27ppb，A、B標準品各1mL，其余各0.5mL，直接使用。

六：溶液配制

配液1: 洗滌工作液

   用去離子水將20 ×濃縮洗滌液按1 : 19體積比進行稀釋。配好的洗滌工作液在4 ℃環(huán)境可保存一    個月，用前一天取出回溫。

配液2:  1×T2毒素樣品稀釋液     

   用去離子水將2×T2毒素樣品稀釋液按1:1體積比進行稀釋，用于樣本的稀釋，配好后在4℃環(huán)境可保存一個月，用前一天取出回溫。

配液3: 樣品提取液

將甲醇與去離子水按V_甲：V_水=4:1 體積比配制成80%甲醇，即樣品提取液。 

七、樣本前處理                                                   

樣本處理前須知：

① 處理完的樣品應及時進行下步檢測，實驗中必須使用一次性吸頭，吸取不同試劑時要更換吸頭。

② 樣本數(shù)目超過8個時推薦使用排槍加樣。

乳豬料、豬育肥料、花生粕、牛飼料、 全麥、全玉米（稀釋倍數(shù)：100倍）

 ① 稱取粉碎樣品1.0 g ± 0.05 g至離心管中，加入 10 mL 樣品提取液（配液3）， 震蕩提取1 min；

② 4000 r / min離心5 min；

  ③ 小心移取上清液100 μL 加到400μL 1 ×T2毒素樣品稀釋液中， 混勻，取50 μL用于分析。  

八、 酶標免疫測定程序

• 將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，待其*回  升至室溫（20～25℃）后方可使用。注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
•  按標準品和樣品雙孔平行的數(shù)量使用微孔。
•  加標準品/樣品、酶、抗體：加標準品/樣品50µL到對應的微孔中，加入T2毒素酶標物50µL/孔，再加入T2毒素抗體50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃環(huán)境中反應20min。
•  洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，

加入洗滌工作液250µL/孔，每次靜置20s，甩去孔內(nèi)液體，重復洗滌3次，后一次用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。

•  顯色：加入底物液A液50µL/孔，再加底物    

液B液50µL/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置37℃避光環(huán)境中反應10min。

•  測定：加入終止液50µL/孔，用酶標儀立即  測定450nm處的吸光度值（建議用雙波長450/630nm）檢測。

九、 結(jié)果判定

以標準品百分吸光率為縱坐標，以T2毒素標準品濃度（ppb）的半對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中T2毒素實際濃度。（詳見試劑盒專業(yè)分析軟件，以便進行大量樣本的分析計算。）

十、 注意事項

① 洗板拍干后應立即進行下一步操作。

② 反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。

③ 不使用過了有效期的試劑盒，不交換使用不同批號的試劑。

④ 0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。

⑤ 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為10～15min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到20min，反之則減短反應時間。

⑥ 未提及樣本請致電本公司技術(shù)服務部。

十一、貯藏條件及保存期

    貯藏條件： 2～8℃

保 質(zhì) 期： 12個月

十二、問題與對