植物DNA核酸免提取試劑盒（多糖多酚類）

試劑盒應用

本試劑盒采用zhuan利裂解液配方在10分鐘內(nèi)完成植物葉片、根、莖、花蕊、種子等的裂解、提取和純化。提取對象包括棉花、馬鈴薯、鐵皮石斛等。整個提取過無需使用蛋白酶K等酶類制劑。提取DNA可用于PCR、qPCR、Sorthern Blot、分子克隆、文庫構(gòu)建等。

本試劑盒僅供研究使用，不可用于臨床、食品、化妝品等領域。

試劑盒組成

備注：第一次使用前，在洗滌液DPW2中加入48mL無水乙醇，并標記“√"和時間，避免重復加入。

保存條件

室溫保存一年。

自備材料

水浴鍋或金屬浴、無水乙醇、無DNase和無RNase離心管、β-巰基乙醇、RNaseA（10mg/mL，或貨號QR0101）

使用方法

1. 20-100mg新鮮植物樣本經(jīng)過液氮研磨后，加入700μL裂解液DPP和35μL β-巰基乙醇，渦旋30秒。

2. 55℃孵育1分鐘。

備注：淀粉含量高的樣本直接進行步驟3。

3. 12,000rpm離心1分鐘，吸取500μL上清液。

4. （選做）加入5μL RNase A（10mg/mL），室溫靜置5-10分鐘。

5. 加入250μL無水乙醇，上下顛倒混勻。

6. 全部加入DNA吸附柱中，12,000rpm離心1分鐘，倒掉收集管中廢液。

7. 向DNA吸附柱中加入500μL洗滌液DPW1，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

8. 向DNA吸附柱中加入500μL洗滌液DPW2，12,000rpm離心30秒，倒掉收集管中廢液。

9. 重復步驟8一次。

10. 12,000rpm離心2分鐘，倒掉收集管中廢液。

11. 將DNA吸附柱放入新無DNase和無RNase離心管中，加入30-50μL洗脫液P，室溫放置1分鐘。

12. 12,000rpm離心2分鐘，得到DNA溶液，-80℃保存。

注意事項

1. 經(jīng)常更換手套，防止DNA污染。

2. 使用無DNase無RNase的吸頭和離心管，防止DNA降解。

3. 常更換吸頭，防止交叉污染。

4. 動作輕柔，防止基因組DNA斷裂。

5. 為了提高洗脫效率，可提前將洗脫液P置于65℃水浴后再使用。